CRISPR之道：基因编辑的往昔、今朝与将来,www.hippobiotec.com

2024年，Martin 、Oana Pelea和Martin共同撰写的《Past, present and future of CRISPR genome editing technologies》在《Cell》杂志发表。

这篇综述旨在为读者提供一个关于CRISPR技术演进的***视角，探讨其在基础研究和人类医学中的当前应用，以及面临的技术挑战和未来发展的方向。

CRISPR-Cas9技术为基因组编辑领域带来了革命性的变革，因其在简化基因编辑过程中的突出贡献，Emmanuelle Charpentier和Jennifer A. Doudna被授予了2020年诺贝尔化学奖。

特征	Cas9	Cas12a（Cpf1）
来源	Streptococcus pyogenes	Lachnospiraceae bacterium和Prevotella sp.
PAM	NGG	TTTN
切割机制	在PAM序列之前的3个核苷酸处产生双链断裂	在PAM序列远端产生双链断裂
gRNA	crRNA+tracrRNA OR sgRNA	只需要一个crRNA
编辑范围	适用于大多数遗传编辑任务	在特定应用中可能更有优势，尤其是AT富集区域
特点	***率和特异性，广泛使用	在减少非特异性靶向方面可能更优，允许更长的插入片段

DSB的基因编辑：利用Cas9和Cas12a核酸酶进行基因敲除和有限的HDR介导敲入编辑。
碱基编辑：通过Cas9切口酶与核苷酸修饰酶的融合体实现单个核苷酸碱基的直接转换。
主编辑：结合Cas9切口和逆转录酶，使引导RNA实现短DNA序列的插入、删除和替换。
转录调节器和RNA编辑器：使用去活化的Cas9 (dCas9) 与转录调节域融合，以及利用RNA靶向的Cas13核酸酶进行转录物的降解或编辑。

《A novel CRISPR_Cas14a-based electrochemical biosensor for ultrasensitive detection of Burkholderia pseudomallei with PtPd@PCN-22》文献于2023年发表在《Biosensors and Bioelectronics》杂志上。

本文介绍了一种新型的CRISPR/Cas14a基电化学生物传感器，用于超灵敏检测伯克霍尔德菌（Burkholderia pseudomallei）的DNA，sgRNA（单向导RNA，small guide RNA）扮演了核心角色，是实现对目标DNA序列特异性识别和切割的关键因子。sgRNA是CRISPR/Cas系统的组成部分，它通过与Cas蛋白结合形成复合体，指导复合体识别并切割特定的DNA序列。在CRISPR/Cas14a系统中，sgRNA的设计对于实现对伯克霍尔德菌DNA的高特异性识别至关重要。

sgRNA(222nt) was transcribed in vitro by Huzhou Hippobio Technologies Co., Ltd. (China).

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参考资料：

[1] Pacesa M, Pelea O, Jinek M. Past, present, and future of CRISPR genome editing technologies[J]. Cell, 2024, 187(5): 1076-1100.

[2] Li C, Liu C, Liu R, et al. A novel CRISPR/Cas14a-based electrochemical biosensor for ultrasensitive detection of Burkholderia pseudomallei with PtPd@ PCN-224 nanoenzymes for signal amplification[J]. Biosensors and Bioelectronics, 2023, 225: 115098.

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